質(zhì)粒DNA分離和純化：純化要求質(zhì)粒DNA中不應(yīng)存在對后續(xù)實驗中的酶活性有抑制作用的有機溶劑分子或過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、基因組和RNA的污染。不同的后續(xù)實驗對于質(zhì)粒純度的要求不同，常規(guī)的分子生物學(xué)實驗（如酶切、測序等）普通純度的質(zhì)粒即可滿足實驗，而對于轉(zhuǎn)染實驗，要求質(zhì)粒的純度較高（如高純度或無內(nèi)毒素）?？梢赃x擇不同的質(zhì)粒提...

Lowry法蛋白濃度測定目錄號規(guī)格價格PC0030-10001000T280.00產(chǎn)品簡介：Lowry法包括兩步反應(yīng)：*步是在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物；第二步是此絡(luò)合物將Folin試劑還原，產(chǎn)生深藍(lán)色，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。定量范圍為5～100μg/ml蛋白質(zhì)。Folin試劑顯色反應(yīng)由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此樣品中若含有...

BCA蛋白濃度測定目錄號規(guī)格價格PC0020-500500T280.00產(chǎn)品簡介：Bicinchoninicacid（BCA）法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu+。兩分子BCA與一個Cu+螯合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有高的光吸...

Bradford蛋白濃度測定目錄號規(guī)格價格PC0010-25002500T150.00產(chǎn)品簡介：Bradford法是常用的蛋白質(zhì)快速定量方法。CoomassiebrilliantblueG-250與蛋白質(zhì)結(jié)合使染料的大吸收峰由465nm變?yōu)?95nm，溶液的顏色由棕色變?yōu)樘m色，595nm波長下吸光度值與蛋白含量成正比。靈敏度比Lowry法高4倍，與BCA法相...

蛋白電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺（簡稱TEMED）和催化劑過硫酸銨（簡稱AP）或核黃素（即vitaminB2）的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，簡稱PAGE）S...

胍鹽/β-巰基乙醇法適用于各種不同動物材料和次生代謝物少的植物材料。在這種方法中，胍鹽使細(xì)胞充分裂解，β-巰基乙醇作為蛋白的變性劑在實驗全程中可以抑制RNase的活性，保護(hù)RNA不被降解。

異硫氰酸胍/苯酚法異硫氰酸胍/苯酚法是一種傳統(tǒng)的RNA提取方法，適用于大部分動植物材料，但對于次生代謝產(chǎn)物較多的植物材料提取RNA效果較差。異硫氰酸胍能使核蛋白復(fù)合體解離，并將RNA釋放到溶液中，采用酸性酚/氯仿混合液抽提，低pH值的酚將使RNA進(jìn)入水相，而蛋白質(zhì)和DNA仍留在有機相，從而可以完成RNA的提取工作。Solarbio公司的Trizol和總RNA...

DNA的儲存儲存溶液：DNA為兩性解離分子，在堿性條件下較穩(wěn)定，因此一般用TE（pH8.0）保存。TE的成分為：10mMTris-HCl（Tris與鹽酸形成強的緩沖對）；1mMEDTA（乙二胺四乙酸，能螯合二價金屬陽離子，抑制DNase的活性）；pH8.0（堿性條件可減少DNA的脫氨作用，防止降解）。ddH2O的正常pH值為7.0，可作為DNA的儲存液，但有...

基因組DNA提取的原則1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性（因為遺傳信息全部儲存在核酸一級結(jié)構(gòu)中，故完整的一級結(jié)構(gòu)是保證核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的基礎(chǔ)）。2、排除其它分子（如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、有機溶劑等）的污染，使下游試驗順利進(jìn)行。

RNA純化及獲得純化要求RNA樣品中不應(yīng)存在對酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染。排除DNA分子的污染。純化方法及沉淀1、有機溶劑抽提法氯仿抽提：在使用RNA提取試劑進(jìn)行RNA提取時，常使用氯仿進(jìn)行抽提，以去除蔗糖、蛋白等雜質(zhì)，并促進(jìn)水相與有機相的分離，從而達(dá)到純化RNA的目的。沉淀：氯...

RNA評價與鑒定提取得到RNA溶液后，我們需要對RNA進(jìn)行相關(guān)的質(zhì)量檢測，以確定它是否符合后續(xù)實驗的要求。RNA用于不同的后續(xù)實驗，對其質(zhì)量要求不盡相同。cDNA文庫構(gòu)建要求RNA完整且無酶等抑制物殘留；Northernblot實驗對RNA完整性要求較高，對酶反應(yīng)抑制物殘留要求較低；RT-PCR實驗對RNA完整性要求不太高，但對酶反應(yīng)抑制物殘留要求嚴(yán)格。因此...

RNA的保護(hù)與DNA提取實驗相比，RNA的提取實驗常常較為困難，這主要是由于RNA非常容易降解。而造成RNA降解的原因來自內(nèi)因和外因兩個方面。內(nèi)因：RNA核糖殘基的2’和3’位置帶有羥基，易被水解；外因：生物體內(nèi)和外部環(huán)境中存在大量RNase，并且RNase不易失活，高溫后仍然能夠正確折疊恢復(fù)活性。因此，從樣品的儲存、RNA的提取以及RNA提取完成后的保存，...

細(xì)胞從培養(yǎng)皿上的解離以下通用步驟可以在保持細(xì)胞完整性的同時從培養(yǎng)器皿中分離多種細(xì)胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細(xì)胞系。應(yīng)通過實驗來確定不同體系所需的佳條件和濃度。?在傳代培養(yǎng)時監(jiān)測細(xì)胞存活率。?細(xì)胞存活率應(yīng)大于90%。?對于無血清培養(yǎng)基，建議降低胰酶用量。1．去除器皿中原有細(xì)胞培養(yǎng)基。2．用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細(xì)胞。將清洗溶液加到培養(yǎng)瓶中與...

原代組織細(xì)胞的解離從原代組織上獲取單個細(xì)胞懸液的常用方法是利用酶的解聚作用。盡量縮短用酶處理細(xì)胞的時間，以獲得高的存活率。按下面的方法解聚整個組織，以獲得大量細(xì)胞。胰酶1．先去除無關(guān)組織，然后用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。通過在不含鈣鎂的平衡鹽溶液進(jìn)行重懸來清洗組織碎塊。待組織碎塊沉降后去掉上清液。重復(fù)清洗2-3次。2．將裝有組織碎塊的容...

深低溫保藏細(xì)胞的解凍深低溫保藏的細(xì)胞十分脆弱，要輕柔操作。快速解凍深低溫保藏的細(xì)胞，然后直接將其接種到*生長培養(yǎng)基中，如果細(xì)胞對抗凍劑（DMSO或甘油）特別敏感，則離心除去抗凍劑，然后將細(xì)胞接種到*生長培養(yǎng)基中。下面是深低溫保藏細(xì)胞的建議解凍步驟：直接接種法1．從凍存管中取出細(xì)胞，用37℃水浴快速解凍。2．將細(xì)胞直接接種到*生長培養(yǎng)基中。每毫升凍存細(xì)胞需要1...