Sephadex G-50 medium 葡聚糖凝膠G-50

 
葡聚糖凝膠 G-50 Sephadex G-50使用說(shuō)明
 
化學(xué)和物理性質(zhì)
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶
液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級(jí)分
離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影
響。
葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細(xì)級(jí)的葡聚糖凝膠是用于需要分辨率的柱
色譜和薄層色譜。粗級(jí)和中級(jí)的凝膠用于制備性色譜過(guò)程，可在較低的壓力下獲
得較高的流速。另外，粗級(jí)也可用于批量工藝。
化學(xué)穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑（除非它被化學(xué)降解）。它在水、鹽溶液、有機(jī)
溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的，在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長(zhǎng)期接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應(yīng)避免使用。
物理穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠并不熔融，可以在濕態(tài)、中性 PH 進(jìn)行滅菌或在高壓滅菌器 120
℃、 30 分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開(kāi)始焦糖化。
葡聚糖凝膠的機(jī)械強(qiáng)度取決于交聯(lián)度。 
產(chǎn)品說(shuō)明：
產(chǎn)  品  名  稱(chēng)  分  離  范  圍  應(yīng)   用
葡聚糖凝膠 G-10  <700  緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子
葡聚糖凝膠 G-15  <1500  緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子
葡聚糖凝膠 G-25  1000-5000  工業(yè)上脫鹽及交換緩沖液
葡聚糖凝膠 G-50  1000-30000  多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測(cè)定
葡聚糖凝膠 G-75  2000-70000  蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定
葡聚糖凝膠 G-100  2000-120000  蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定
葡聚糖凝膠 G-150  5000-300000  蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定
葡聚糖凝膠 G-200  5000-600000  蛋白分離純化、分子量測(cè)定、平衡常數(shù)測(cè)定

使用方法：
1. 乙醇浸泡：
  在室溫下，將干粉浸泡于 50-60%乙醇中至少 24 小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠
溶脹，用無(wú)鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2. 無(wú)鹽水浸泡：
  室溫下，在無(wú)鹽水中充分溶脹 24 小時(shí)，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹，
然后；
3. 鹽酸浸泡：
  在常溫下再用 0.2N HCl 浸泡 12 小時(shí)，間隙攪拌，濾干，水洗只中性；
4. 將溶脹好的凝膠脫氣后（真空抽濾或超聲波）根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，
注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層；
5.  上樣前平衡層析柱至少 3-5 個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的
PH值等于上柱的 Buffer 的 PH值）；
6.  凝膠過(guò)濾的上樣量一般為 5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在 1-2%的
床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在 40-50cm  以下，過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大
的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比
為 5：1 即可；
7.  洗脫方法：
    可以用無(wú)鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫；在上柱 Buffer 中加入 NaCl
等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化；
8.  在位清洗（CIP）
    凝膠使用十次后作一次 CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。
方法是以 40cm/h 用 1M *反向洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡
緩沖液再生。
 
備注: 其它規(guī)格葡聚糖凝膠處理方法類(lèi)似。

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