谷胱甘肽還原酶（GR）活性測(cè)定試劑盒說明書 技術(shù)文章

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谷胱甘肽還原酶（Glutathione Reductase, GR）活性測(cè)定試劑盒

商品貨號(hào)：QS1111
英文名稱：Glutathion Reductases(GR) Assay Kit
別名：谷胱甘肽還原酶試劑盒 GR Kit 谷胱甘肽還原酶（GR）試劑盒 谷胱甘肽還原酶（GR）測(cè)試盒
檢測(cè)方法：常量法

• 產(chǎn)品詳細(xì)介紹

測(cè)定意義：

GR是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶，是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶之一（通常昆蟲中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH還原GSSG生成GSH，有助于維持體內(nèi)GSH/GSSG比值。GR在氧化脅迫反應(yīng)中對(duì)活性氧清除起關(guān)鍵作用，此外GR還參與抗壞血酸－谷胱甘肽循環(huán)途徑。

測(cè)定原理：

GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH，同時(shí)NADPH脫氫生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，相反NADP+在該波長(zhǎng)無吸收峰；通過測(cè)定340 nm吸光度下降速率來測(cè)定NADPH脫氫速率，從而計(jì)算GR活性。

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• 產(chǎn)品說明書
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貨號(hào)：QS1111                           規(guī)格：50 管/48 樣

谷胱甘肽還原酶（glutathione reductase, GR）活性測(cè)定試劑盒說明書

                               紫外分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

GR 是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶，是谷胱甘肽氧化還原循 環(huán)的關(guān)鍵酶之一（通常昆蟲中 GR 被 TrxR 取代）。GR 催化 NADPH 還原 GSSG 生成 GSH，有助于維 持體內(nèi) GSH/GSSG 比值。GR 在氧化脅迫反應(yīng)中對(duì)活性氧清除起關(guān)鍵作用，此外 GR 還參與抗壞 血酸－谷胱甘肽循環(huán)途徑。

測(cè)定原理：

GR 能催化 NADPH 還原 GSSG 再生 GSH，同時(shí) NADPH 脫氫生成 NADP+；NADPH 在 340 nm 有特 征吸收峰，相反 NADP+在該波長(zhǎng)無吸收峰；通過測(cè)定 340 nm 吸光度下降速率來測(cè)定 NADPH 脫氫 速率，從而計(jì)算 GR 活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL 石英比色皿和蒸餾水

試劑組成和配置：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 5.0 mL 蒸餾水，混勻。

試劑三：液體×1 支，4℃保存。

粗酶液提?。?/strong>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加 入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 15min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí) 間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 15min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清等液體：直接測(cè)定。

操作步驟：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一置于 25℃（普通物質(zhì)）或者 37℃（哺乳動(dòng)物）中預(yù)熱 30min。

3. 空白管：取 1mL 石英比色皿，加入 850μ L 試劑一，100μ L 試劑二，50μ L 試劑三，充分混 勻，于 340nm 處測(cè)定 10 s 和 190 s 吸光度，記為 A 空 1 和 A 空 2，△A 空白管= A 空 1﹣A 空 2。

4. 測(cè)定管：取 1mL 石英比色皿，加入 750μ L 試劑一，100μ L 試劑二，100μ L 上清液，50μ L 試劑三，充分混勻，于 340nm 測(cè)定 10 s 和 190 s 吸光度，記為 A 測(cè) 1 和 A 測(cè) 2，△A 測(cè)定管= A 測(cè) 1﹣A 測(cè) 2。

注意：空白管只需要測(cè)定一次。

計(jì)算公式： 

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0 條件下，每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/mg prot)= [ (△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反總×10⁹ ]÷[Cpr×V 樣]÷T = 536×(△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0 條件下，每克樣本每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè) 酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/g)= [ (△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反總×10⁹ ] ÷(W×V 樣÷V 樣 總)÷T = 536×(△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷W

(3) 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0 條件下，每 10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/10⁴ cell)= [ (△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反總×10⁹ ] ÷(細(xì)胞數(shù) 量×V 樣÷V 樣總)÷T = 536×(△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0 條件下，每毫升液體每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/mL)= [ (△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反總×10⁹ ]÷×V 樣÷T = 536×(△A 測(cè)定管-△A 空白管)

ε ：NADPH 摩爾消光系數(shù) 6.22×10₃ L/mol/cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積，1000μ L=0.001 L； 10⁶：1 mol=1×10⁶ μ mol； Cpr：上清液蛋白濃度（mg/mL）；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體 積，100μ L =0.1 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3 min。

注意事項(xiàng)：

（1）樣品處理等過程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當(dāng)日測(cè)定酶活力，勻漿液避免反復(fù)凍融；

（2）試劑二須現(xiàn)配現(xiàn)用，配制完后，置于冰上，未使用完的 4℃保存，三天內(nèi)使用完。

（3）測(cè)定前須先用 1～2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保 180s 內(nèi)吸光值變化呈線性，哺乳動(dòng)物組織一般 須用試劑一稀釋 2～5 倍；

（4）細(xì)胞中 GR 活性測(cè)定時(shí)，細(xì)胞數(shù)目須在 300 萬-500 萬之間，細(xì)胞中 GR 的提取時(shí)可加試劑 一后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞。

系列產(chǎn)品及單價(jià)